蛋白的表達(dá)系統(tǒng)一般可以分為:
1、原核表達(dá)系統(tǒng):大腸桿菌是最為常用的蛋白表達(dá)體系,具有遺傳背景清楚、易于繁殖、成本低、表達(dá)量高等優(yōu)點(diǎn),但缺乏翻譯后修飾機(jī)制,不適用于需要糖基化或者特定位點(diǎn)切割等修飾的蛋白表達(dá),因此適合于相對(duì)分子量小于100k且翻譯后修飾不影響結(jié)構(gòu)和功能的蛋白表達(dá)??莶菅挎邨U菌也可用于蛋白表達(dá),其優(yōu)點(diǎn)是具有較強(qiáng)的分泌表達(dá)能力和較低的蛋白酶活性等,也逐漸受到關(guān)注。
2、真核表達(dá)系統(tǒng):可以實(shí)現(xiàn)不同程度的糖基化等翻譯后修飾,更接近于來(lái)自真核蛋白的天然活性。主要包括 ① 酵母表達(dá)系統(tǒng)(常用畢赤酵母、釀酒酵母等),酵母可高密度發(fā)酵又可以進(jìn)行翻譯后修飾 ,兼具了原核和真核宿主細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn),也是一種良好的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。② 昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng):外源基因通過(guò)桿狀病毒載體轉(zhuǎn)染昆蟲(chóng)細(xì)胞進(jìn)行表達(dá),是一種真核蛋白的高表達(dá)體系,適合于一些在原核體系難以表達(dá)的蛋白,比如膜蛋白、大分子質(zhì)量蛋白、蛋白激酶等。③ 哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng):哺乳動(dòng)物細(xì)胞的翻譯修飾效率遠(yuǎn)高于酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞體系等,結(jié)構(gòu)和功能更接近于天然真核蛋白,但表達(dá)量低、成本高。
3、無(wú)細(xì)胞表達(dá)體系:可以從質(zhì)粒和PCR產(chǎn)物直接表達(dá)目的蛋白,表達(dá)體系是無(wú)細(xì)胞提取物,來(lái)自于大腸桿菌、麥胚、兔網(wǎng)織紅細(xì)胞等。無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)優(yōu)點(diǎn)是可表達(dá)其它系統(tǒng)難以表達(dá)的產(chǎn)物、高通量、可自動(dòng)化,但表達(dá)量低、成本高昂。